Revista de Ciências Agrárias

Compreensão dos mecanismos de resistência da videira ao míldio usando uma abordagem de biologia de sistemas

Grapevine downy mildew, caused by the fungus Plasmopara viticola (Berk. & Curt.) Berl. & de Toni was introduced in European vineyards in the 1870s and quickly spread to all major grape-producing regions worldwide. The early events of grapevine resistance to P. viticola were accessed using transcriptomic, metabolomic and proteomics approaches in the cultivars, ‘Regent' and ‘Trincadeira', resistant and susceptible to downy mildew, respectively. At the transcript level the resistant genotype ‘Regent' presents signalling and defence-related transcripts up-regulated as soon as 6hpi. At the metabolome level, our results show that ‘Trincadeira' and ‘Regent' are intrinsically different as ‘Regent', the resistant cultivar, is able to activate the phenylpropanoid pathway and to accumulate linolenic acid, the precursor of jasmonate in the octadecanoid cascade. At the proteome level ‘Regent' presents upregulated proteins mainly belonging to the functional categories of photosynthesis, carbohydrate metabolism and defence, indicating that this cultivar makes a more efficient use of light, in CO2 assimilation and obtaining intermediate metabolites from photoassimilates for the biosynthesis of secondary metabolites and subsequent defence responses. Our data brings new insights on the molecular processes underlying resistance to Plasmopara viticola, which may eventually enable the design of novel strategies for pathogen control.

O míldio da videira, causado pelo fungo oomycete obrigatório Plasmopara viticola (Berk. & Curt.) Berl. & de Toni foi introduzido na Europa em 1870 e rapidamente se espalhou para todas as regiões produtoras de vinho no mundo. Neste estudo foram utilizadas abordagens de transcritómica, proteómica e metabolómica e duas cultivares de videira, ‘Regent' e ‘Trincadeira', resistente e suscetível ao fungo P. vitícola tendo em vista a caracterização dos mecanismos de defesa. Ao nível da transcritómica, o genótipo resistente ‘Regent' apresenta uma ativação de transcritos associados a processos de sinalização e defesa, 6 horas após inoculação. No que se refere à metabolómica, os resultados obtidos demonstram que os dois genótipos são inerentemente diferentes sendo que na cultivar ‘Regent' há uma ativação da via biossintética dos fenilpropanoides e uma acumulação de ácido linolénico, o precursor do ácido jasmónico logo após a inoculação com o P. viticola. Ao nível da proteómica verificou-se que no genótipo resistente há indução de proteínas ligadas à fotossíntese, metabolismo dos carbohidratos e defesa após a inoculação com o fungo, o que sugere que este genótipo é mais eficaz na assimilação de CO2, na produção de energia através da fotossíntese e na produção de compostos intermediários para subsequente ativação dos mecanismos de defesa. Os nossos resultados constituem um contributo para a compreensão dos processos moleculares subjacentes à ativação de mecanismos de defesa no genótipo resistente ‘Regent', o que se poderá refletir no estabelecimento de novas estratégias para o controlo desta doença.

Parâmetros morfoanatómicos foliares de Arundo donax e eficácia do glifosato

Cuticle thickness is known to affect the amount of active ingredient that reaches the target site of a post emergence herbicide and consequently its efficacy. So, this work aimed to relate glyphosate efficacy with the thickness of leaf cuticle of young and mature leaves of Arundo donax. Glyphosate was applied at different development stages of the invasive species, in spring, summer and autumn at the concentrations of 0.675; 1.350 and 2.025 g L-1. Cuticle thickness of mature and young leaf blade and leaf sheath was measured on transverse sections by light microscopy. Despite the significant differences in the cuticle thickness between young and mature leaves, this did not seem affect the efficacy of glyphosate uptake since no significant differences were observed between young and mature leaves glyphosate treatments. But herbicide efficacy was dependent of the plant development stage. Higher efficacy of glyphosate was recorded when plots were sprayed at the end of October (flowering) compared to end April and mid June applications. Mortality of giant reed was higher than 90% one year after treatment only in autumn treatments. This result suggests that other mechanisms are involved, probably the reserves carrying over to rhizomes, on herbicide efficacy.

É sabido que a espessura da cutícula afeta a quantidade dum herbicida de pós emergência que chega ao local de ação e consequentemente a sua eficácia. Assim, este trabalho teve por objetivo relacionar a eficácia do glifosato com a espessura da cutícula de folhas jovens e adultas da invasora ribeirinha Arundo donax. O glifosato foi aplicado em diferentes estágios de crescimento da invasora, na primavera, verão e outono nas concentrações de 0,675; 1,350 e 2,025 g L-1. A espessura da cutícula foi medida por recurso a microscopia ótica em cortes transversais de folhas adultas e jovens, limbo e bainha, de A. donax. Apesar de haver diferenças significativas na espessura da cutícula de folhas jovens e adultas da invasora, tal facto não afetou a eficácia do glifosato dado que não se registaram diferenças significativas nos tratamentos herbicidas quer nas plantas com folhas jovens quer nas com folhas adultas. Todavia a eficácia variou com o estado de crescimento. As eficácias mais elevadas e significativas foram observadas nos talhões tratados à floração, fim de outubro. Nestes, um ano após o tratamento químico a eficácia era superior a 90%. Estes resultados apontam para que outros mecanismos envolvidos na eficácia do glifosato, possivelmente devido a uma maior translocação para os órgãos de reserva, associada à translocação dos assimilados que ocorre neste período de crescimento.

Aspectos biológicos de Tuta absoluta (Lepidoptera: Gelechiidae) criada em folhas de diferentes genótipos de tomate

Avaliou-se, em condições de laboratório, a resistência de genótipos de tomateiro, Lycopersicum esculentum(Miller) (cv. ‘Santa Clara' e híbridos: Saladete Italiano Ty Tyna, Santa Cruz Débora Ty, Salada Lumi e Saladete Italiano Andrea Victory), Lycopersicum hirsutum f. glabratum (C.H. Mull.) (linhagens PI 134417 e PI 134418) e Lycopersicum pimpinellifolium (Just) (linhagens NAV 1062 e PI 126931) sobre Tuta absoluta (Meyrick) (Lepidoptera: Gelechiidae). A linhagem PI 134418 foi, dentre os genótipos avaliados, a que apresentou efeito mais negativo sobre T. absoluta, em relação à testemunha (Santa Clara), alongando a fase larval, reduzindo a sobrevivência larval e a sobrevivência global. A linhagem PI 134417 também prejudicou o desenvolvimento de T. absoluta, alongando a fase larval e reduzindo a sobrevivência larval. Os demais genótipos não apresentaram efeito negativo sobre a biologia de T. absoluta. Concluiu-se que PI 126931 é suscetível, e NAV 1062, Santa Clara, Tyna, Débora, Lumi e Andrea Victory são altamente suscetíveis a T. absoluta, enquanto PI 134418 e PI 134417 destacaram-se com alta resistência e moderada resistência, respectivamente, a T. absoluta, do tipo antibiose.

The resistance of tomato genotypes, Lycopersicon esculentum (Miller) (cv. Santa Clara, hybrids: Saladette Italian Ty Tyna, Santa Cruz Débora Ty, Salad Lumi and Saladette Italian Andrea Victory), Lycopersicon hirsutum f. glabratum (C,H, Mull.) (lines PI 134417 and PI 134418) and Lycopersicum pimpinellifolium (Just) (lines NAV 1062 and PI 126931) to Tuta absoluta (Meyrick) (Lepidoptera: Gelechiidae) was evaluated under laboratory conditions. The line PI 134418 had the most negative effect on T. absoluta in comparison to the control (Santa Clara), lengthening the larval stage and reducing larval and global survival. The line PI 134417 also affected the development of T. absoluta lengthening the larval stage and reducing the larval survival. The other genotypes showed no negative effect on the biology of T. absoluta. We concluded that PI 126931 is susceptible and NAV 1062, Santa Clara, Tyna, Débora, Lumi and Andrea Victory are highly susceptible to T. absoluta, whereas PI 134418 and PI 134417 highlighted with high resistance and moderate resistance, respectively, to T. absoluta of antibiosis-type.

Xylella fastidiosa: uma nova ameaça para a agricultura e floresta portuguesas

Xylella fastidiosa is a gram-negative bacterium classified as a quarantine pest by EPPO (A1 list), since 1981. Is a xylem-limited bacteria, with a wide host range (more than 300 species), that affects economically important agricultural crops. It is a challenge of almost 30 years in America for grapevine (Pierce's disease) and citrus (Citrus Variegated Chlorosis) farmers. The first outbreak in Europe was reported in October 2013 in southern Italy, in Puglia region, Salento area. The CoDiRO strain (Xylella fastidiosa subsp. pauca) was responsible for the named - Complesso del disseccamento rapido dell'olivo (CoDiRO). More than 8000 ha of olive trees have been destroyed and nearly 21 000 ha are in quarantine, which counts for more than 53 million euros in losses. It was confirmed, in January 2015, by the European Food Safety Authority, that, the X. fastidiosa spreading is far from being contained. EFSA experts have alerted European countries that X. fastidiosa is now “very likely” to spread, posing a major risk to European olive trees and have warned that the disease is a “very serious threat” to European agriculture. There is no record of successful eradication of X. fastidiosa once it has been established. A wide-ranging research is necessary because X. fastidiosa has a remarkable power of adaptation. It has been proven that introgression events allowed X. fastidiosa to access new hosts. Its natural competence to acquire new genes turns it into a phytopatogen with all the necessary conditions to adapt almost to any ecological niche.

Xylella fastidiosa é uma bactéria Gram-negativa classificada como organismo de quarentena pela EPPO (Lista A1), desde 1981. É uma bactéria restrita ao xilema, com uma ampla gama de hospedeiros (mais de 300 espécies), que afeta as culturas agrícolas e espécies florestais de grande importância económica. É um desafio de quase 30 anos na América para os produtores de videira (doença de Pierce) e citrinos (clorose variegada dos citrinos). O primeiro surto na Europa foi reportado em outubro de 2013, no sul da Itália, na região de Apúlia, área de Salento. A estirpe CoDiRO (X. fastidiosa subsp. pauca) foi responsável pela doença - “Complesso del disseccamento rapido dell'olivo” (CoDiRO). Mais de 8000 ha de oliveiras foram destruídas, e quase 21 000 ha estão em quarentena, o que equivale a mais de 53 milhões de euros em prejuízos. É confirmado pela EFSA, que emitiu um alerta em janeiro de 2015, que a disseminação de X. fastidiosa está longe de estar controlada. Especialistas da EFSA alertaram os países europeus para o facto de ser "muito provável" que X. fastidiosa se dissemine, o que representa um grande risco para olivais europeus, e advertiram que a doença é uma "ameaça muito séria" para a agricultura europeia. Não há registo de planos de erradicação bem-sucedidos, assim uma estratégia de investigação abrangente e multidisciplinar, é necessária porque X. fastidiosa tem um notável poder de adaptação. Está provado que eventos de introgressão têm permitido que X. fastidiosa angarie novos hospedeiros. A sua competência natural de adquirir novos genes transforma-a num agente fitopatogénico, com todas as condições necessárias para se adaptar a quase qualquer nicho ecológico.

Potencialidade da Menta pulegium no controlo de mosquitos

Vector control remains an important strategy to fight mosquito-borne diseases, like malaria and dengue. Anopheles species are responsible for vast distribution of malaria, mainly in tropical areas, with dramatic infant morbidity and mortality. Aedes aegypti, the main vector of dengue, has a wide and expanding geographical distribution. It was found in Madeira Island, Portugal, in 2005, and in 2012 the first local dengue outbreak occurred. Also, in the African archipelago of Cape Verde, the first dengue epidemic in 2009, demonstrated that dengue virus is expanding. Phytochemicals offer not only effective mosquito control products, but are also biorational alternatives to organic synthetic pesticides. These chemicals from natural sources, with a high degree of biodegradation, are environmentally sound control agents. In the present study, Mentha pulegium essential oils (EOs) were assessed for larvicidal effects on third instar larvae of Anopheles atroparvus, Anopheles gambiae, Anopheles stephensi and Aedes aegypti (from Madeira and Cape Verde). The EOs chemical composition of M. pulegium from Portugal and Cape Verde was determined by 13C NRM and GC, GC-MS analysis. Larvicidal effect was observed on all species assayed with the strongest effect on Ae. aegypti from Cape Verde Islands.

O controlo vetorial continua preponderante no combate às doenças transmitidas por mosquitos, tais como malária e dengue. Anopheles spp. são responsáveis pela vasta distribuição de malária, sobretudo em áreas tropicais, causa de elevada morbilidade e mortalidade infantil. Aedes aegypti, o principal vetor da dengue, tem ampla distribuição geográfica, tendo sido encontrado na Ilha da Madeira, Portugal, em 2005 e em 2012 ocorreu o primeiro surto. Em Cabo Verde, a primeira epidemia de dengue ocorreu em 2009 demonstrando que o vírus da dengue continua em expansão. Fitoquímicos são potenciais alternativas aos pesticidas orgânicos sintéticos, sendo eficazes no controlo de mosquitos. Produtos químicos, obtidos a partir de fontes naturais, são agentes de controlo com elevado grau de biodegradabilidade, comportando menos riscos ambientais. Neste estudo, os óleos essenciais (OEs) de Mentha pulegium foram testados em larvas de terceiro estádio de Anopheles atroparvus, Anopheles gambiae, Anopheles stephensi e Aedes aegypti (da Madeira e Cabo Verde). A composição química dos OEs de M. pulegium de Portugal e Cabo Verde foi determinada por análise RMN de 13C, por CG e CG-EM. O efeito larvicida foi observado em todas as espécies, sendo maior nas larvas de Ae. aegypti de Cabo Verde.

Morphological and genetic diversity of Biscogniauxia mediterranea associated to Quercus suber in the Mediterranean Basin

Biscogniauxia mediterranea is a widespread fungus that causes charcoal disease on cork oak and other hardwood hosts. It had been considered a secondary pathogen causing the disease only in stressed hosts. However, its frequency and severity have been increasing, inclusive in young trees without other decline signs and developing atypical symptoms. The present work aims to assess the fungus' variability in the Mediterranean basin, following cork oak geographical distribution. A collection of 36 isolates originated from cork oak in Portugal and other Mediterranean countries, from other hosts and from trees with different ages and disease expression were analyzed by cultural characteristics, conidial dimensions, and growth rates at different temperatures and by microsatellite-primed PCR profiles. Clustering UPGMA analyses combining different parameters were preformed. All the approaches revealed high level of intraspecific polymorphism among Mediterranean isolates, not allowing relating the disease development with any analyzed features. The results highlighted the variability of this fungus that induces its adaptation ability in the present worrying scenario of climatic change. All the conditions are gathered to favor the aggravation of the disease in cork oak stands.

Biscogniauxia mediterranea é o fungo responsável pela doença do carvão do entrecasco em sobreiro e outros hospedeiros lenhosos. Tem sido considerado um patogénio secundário que causa doença apenas em hospedeiros debilitados. No entanto, a sua frequência e nocividade têm vindo a aumentar, inclusive em árvores jovens sem outros sinais de declínio e desenvolvendo sintomas atípicos. Este trabalho tem como objetivo avaliar a variabilidade do fungo na bacia mediterrânica, seguindo a distribuição geográfica sobreiro. Uma coleção de 36 isolados provenientes do sobreiro em Portugal e noutros países do Mediterrâneo, de outros hospedeiros e de árvores com diferentes idades e expressão da doença foram analisadas de acordo com as suas características culturais, dimensões de conídios, taxas de crescimento em diferentes temperaturas e por perfis de microsatellite-primed PCR. Foram realizadas análises de clusters UPGMA com diferentes parâmetros. Todas as abordagens revelaram elevado grau de polimorfismo intraespecífico entre os isolados, não permitindo relacionar o desenvolvimento da doença com as características analisadas. Estes resultados evidenciaram a variabilidade do fungo que induz a sua capacidade de adaptação no atual e preocupante cenário de alterações climáticas. Todas as condições estão reunidas para favorecer o agravamento da doença no montado.

Estimativa do tamanho do genoma de seis espécies de ferrugens (Pucciniales)

Os fungos que causam ferrugens caraterizam-se pela especialização relativamente ao hospedeiro, pela biotrofia, por possuírem ciclos de vida complexos e grandes genomas. Neste trabalho a citometria de fluxo foi empregue para determinar o tamanho do genoma de seis espécies de fungos Pucciniales (Basidiomycota), Melampsora pulcherrima, Puccinia behenis, P. cichorii, P. pimpinellae, P. vincae e Uromyces dianthi, agentes causais de ferrugem em Mercurialis annua, Silene latifolia, Cichorium intybus, Pimpinella villosa, Vinca major e Dianthus caryophyllus, respetivamente. Com resultados entre 182,1 e 566,4 Mpb/1C, este estudo contribuiu para o conhecimento do tamanho dos genomas na ordem Pucciniales, reforçando a posição deste táxone como o que engloba os fungos com maior tamanho médio de genoma (335,6 Mpb/1C). Este estudo contribui para uma melhor compreensão dos padrões de distribuição de tamanhos de genoma ao longo da filogenia dos fungos, sugerindo uma ligação entre caraterísticas biológicas e o tamanho do genoma. Em particular, os tamanhos dos genomas de fungos Pucciniales variam fortemente dentro do género, mas também diferem de forma vincada dos genomas de outras ordens em Pucciniomycotina que não Pucciniales, sugerindo que a variação do tamanho do genoma possa ser um elemento ativo na evolução dos agentes causais de ferrugens.

Rust fungi (Basidiomycota, Pucciniales), one of the largest groups of phytopathogenic organisms, are characterised by host specialisation, biotrophy, complex life cycles and enlarged genomes. In this work we have used flow cytometry to determine the genome size of six rust species, Melampsora pulcherrima, Puccinia behenis, P. cichorii, P. pimpinellae, P. vincae and Uromyces dianthi, the causal agents of rust on Mercurialis annua, Silene latifolia, Cichorium intybus, Pimpinella villosa, Vinca major and Dianthus caryophyllus, respectively. With results ranging between 182.1 and 566.4 Mbp/1C, this study has contributed to the knowledge of genome sizes in the order Pucciniales, reinforcing this group as the one with the largest average genome size among fungi, with 335.6 Mbp/1C. By comparing genome sizes and their variability across the fungal kingdom, this study has contributed for understanding the patterns of genome size distribution along the fungal phylogeny, suggesting links between biological specificities and genome sizes. In particular, genome sizes of rust fungi vary greatly within genera, but also differ sharply from other non-Pucciniales orders in the Pucciniomycotina, suggesting that genome size variation may be an active element shaping the evolution of rust fungi.

Monitorização da condição fitossanitária do castanheiro por fotografia aérea obtida com aeronave não tripulada

A doença da tinta (Phytophthora cinnamomi) e o cancro (Cryphonectria parasitica) são as doenças que causam mais danos ao castanheiro europeu (Castanea sativa). Decorridas duas décadas, após a introdução do cancro do castanheiro em Portugal, a hipovirulência começou a observar-se nalguns locais. A população dessas estirpes caracteriza-se pela baixa diversidade em termos de grupos de compatibilidade. Em Portugal muitas das sub-populações pertencem apenas ao grupo EU-11, que aparece somente nalguns locais em Itália. O sucesso dos tratamentos contra o cancro através da hipovirulência depende da forma como a população do fungo se estende na área que se pretende tratar. Neste estudo é apresentada uma alternativa para monitorizar a sanidade de castanhais, através da realização de voos aerofotogramétricos com veículo aéreo não tripulado. Para a monitorização da área tratada e também avaliar o declínio do castanheiro, realizaram-se voos aerofotogramétricos, que abrangem 231 ha. Para o voo foi usado o Veículo Aéreo Não Tripulado (UAV) eBee da Sensefly. Obtiveram-se fotografias aéreas policromadas e de infravermelho próximo (NIR), que foram comparadas com imagens de 2006. Verificou-se que apesar das novas plantações (11%), a área de coberto pelo castanheiro sofreu uma regressão, pois em 129 ha (56%) a condição dos soutos piorou. Grande parte do declínio deve-se aos agentes bióticos, o que pode ser comprovado com observações de campo.

The Chestnut ink disease (Phytophthora cinnamomi) and the chestnut blight (Cryphonectria parasitica) are the diseases that cause more damage to European chestnut (Castanea sativa). After two decades from the first occurrence of chestnut blight in Portugal, the hypovirulence began to be observed in some locations. The population of these strains is characterized by low diversity. Many of the sub-populations belong only to the EU-11 group, which appears only in some orchards in Italy. Successful treatment depends on the way the population of the fungus extends into the area to be treated. This study refers to the monitoring of chestnut decline, by aerophotogrammetric flights, covering 231 ha in the Padrela region (Valpaços). Unmanned Aerial Vehicle (UAV) eBee (Sensefly) was used and color and near infrared (NIR) aerial photographs were obtained. Those photographs were compared to aerial images taken in a national flight in 2006. During the period between 2006-2014 new chestnuts plantations occurred (11%), nevertheless the area covered by chestnut decreased. In 129 ha (56%) the chestnut decline increased. The biotic agents were the principal causes of the C. sativa decline, which was confirmed by field observations.

Utilização de óleos essenciais na proteção de milho armazenado contra Sitophilus zeamais (Coleoptera: Curculionidae)

Laboratory studies were carried out to evaluate the effects of some essential oils from Laurus nobilis and Mentha pulegium against Sitophilus zeamais on stored maize. The concentrated essential oils at different volumes of 0.5 µL, 1.5 µL, 2.5 µL, 5.0 µL and 10 µL, were poured on filter papers with 2 cm Ø each. For diluted oils, the fixed volume of 15 µL of different concentrations of 1:150v/v, 1:100 v/v, 1:75 v/v, 1:50 v/v and 1:10 v/v either in methanol or n-hexane were used to impregnate the filter papers. Treatments with the concentrated oils were more effective. All the concentrations used from M. pulegium provided 100% adult mortality and no progeny production were achieved. L. nobilis has revealed 100% adult mortality at3.185 µL/cm². Regarding the treatments with diluted oils once again the oil from M. pulegium provided 100% adult mortality at concentrations of 1:50 v/v and 1:10 v/v. L. nobilis was not effective at any of the concentrations used. There were no significant differences between the solvents used.

Para avaliar o efeito dos óleos essenciais de Laurus nobilis e Mentha pulegium, no controlo de insetos adultos de Sitophilus zeamais, em milho armazenado, foram efetuados vários ensaios laboratoriais, utilizando-se óleos essenciais concentrados e diluídos, em metanol e n-hexano. Os tratamentos com os óleos essenciais concentrados apresentaram melhores resultados do que com os diluídos. Verificou-se 100% de mortalidade e ausência de descendência (F1) em todas as concentrações testadas de óleo essencial de M. pulegium. No caso de L. nobilis só se obtiveram aqueles mesmos resultados com a concentração mais elevada. Em relação aos óleos essenciais diluídos, os valores de 100% de mortalidade e ausência de descendência (F1) só foram atingidos para a concentração de 1:10 v/v, com M. pulegium e em ambos os solventes. O óleo de L. nobilis não foi eficaz em nenhuma das concentrações ensaiadas, não apresentando diferenças entre os solventes utilizados.

Identificação e caracterização de Pseudomonas syringae pv. actinidiae (Psa) na Região do Entre Douro e Minho (Portugal)

Pseudomonas syringae pv. actinidiae (Psa) é o agente causal do cancro bacteriano da actinídea, doença mais grave desta cultura na atualidade que provoca importantes perdas económicas nos principais países produtores de kiwi. Os sintomas mais característicos da doença incluem pequenas necroses castanhas rodeadas de um halo amarelo nas folhas e exsudados avermelhados nos caules, podendo conduzir à morte da planta. Em Portugal, a doença foi detetada pela primeira vez em 2010, na Região do Entre Douro e Minho. Com este estudo pretende-se identificar e caracterizar isolados de Psa da Região do Entre Douro e Minho. A partir de material vegetal com sintomas da doença proveniente de diferentes pomares de Actinidia deliciosa, isolou-se o agente patogénico e realizou-se a sua identificação e caracterização morfológica e fenotípica através de testes LOPAT, utilização de fontes de carbono (sistema Biolog), perfis de ácidos gordos e através de técnicas moleculares (PCR e BOX-PCR). Os resultados obtidos mostram que os isolados estudados apresentam características morfológicas idênticas, existindo variabilidade ao nível das características fenotípicas. A caracterização molecular mostra que os isolados de Psa da Região do Entre Douro e Minho são semelhantes, sendo idênticas a populações de Psa conhecidas como virulentas (Psa3) identificadas na Europa e na Nova Zelândia.

Pseudomonas syringae pv. actinidiae (Psa) is the causal agent of bacterial canker of kiwifruit, the most severe disease of this culture at the moment, causing significant economic losses in the main kiwi producing countries. The most characteristic symptoms are leaves with small dark-brown necrotic spots surrounded by a yellow halo and red-rusty exudation on the trunks. This disease was detected in Portugal in 2010 in Entre Douro e Minho (EDM) region. This study aims to identify and characterize the Psa population present in this region. The pathogen was isolated from plant material with symptoms of the disease from different Actinidia deliciosa orchards. Identification and characterization was done by morphological and phenotypical tests (LOPAT, Biolog system, fatty acids profile) and molecular techniques (PCR and BOX-PCR). The results showed that the Psa isolates have similar morphological characteristics, however variability at this level was observed. Results of molecular characterization indicate that Psa isolates from EDM region are similar to the most virulent Psa population (Psa3) identified in Europe and New Zealand.

Método de deteção de Pseudomonas syringae pv. actinidiae (Psa) em ramos assintomáticos de actinídea

Pseudomonas syringae pv. actinidiae (Psa) es la responsable del chancro bacteriano del kiwi, una enfermedad que se ha extendido rápidamente en los principales países productores causando importantes pérdidas económicas. Para intentar frenar la dispersión del patógeno y controlar el desarrollo de esta enfermedad, es necesario utilizar técnicas de diagnóstico precoz. El objetivo de este estudio fue aplicar un método de detección temprana en muestras asintomáticas. Se seleccionaron 20 plantas de kiwi (15 de Actinidia deliciosa, 3 de A. arguta y 2 de A. kolomikta) en las que se había confirmado previamente la presencia de Psa, localizadas en Pontevedra (España). La recogida de muestras se realizó durante el reposo vegetativo, tomando de cada planta cuatro ramas del año, con diferente orientación, que se subdividieron en tres submuestras y fueron procesadas mediante lavado interno con una solución salina tamponada. Tres alícuotas de cada submuestra se analizaron por técnicas moleculares y se sembraron en medio King B. Las colonias obtenidas con morfología típica de Psa también se identificaron por técnicas moleculares. La bacteria fue detectada en el 55% de las plantas muestreadas, pero no en todas las ramas de una misma planta. En las ramas que resultaron positivas, Psa se aisló y detectó en las tres submuestras analizadas.

Pseudomonas syringae pv. actinidiae (Psa) é a bactéria causadora do cancro bacteriano da actinídea, uma doença que se expandiu rapidamente nos principais países produtores causando importantes prejuízos. Para tentar conter a propagação do agente patogénico e controlar o desenvolvimento desta doença, é necessário utilizar técnicas de diagnóstico precoce. O objetivo deste estudo foi aplicar um método de deteção precoce em amostras assintomáticas. Foram selecionadas 20 plantas de kiwi (15 de Actinidia deliciosa, 3 de A. arguta e 2 de A. kolomikta) em que já se tinha confirmado a presença de Psa, localizadas en Pontevedra (Espanha). A amostragem foi realizada durante o repouso vegetativo, colhendo 4 ramos do ano de cada planta, com orientações diferentes. Foram subdivididos em 3 sub-amostras e processado por lavagem interna uma solução salina tamponada. Três alíquotas de cada sub-amostra foram analisadas por meio de técnicas moleculares e colocadas em meio King B. As colónias obtidas com morfologia típica de Psa também foram identificadas por técnicas moleculares. A bactéria foi detetada em 50% das plantas amostradas, embora não em todos os ramos da mesma planta. Nos ramos positivos, a Psa foi isolada e detetada nas 3 sub-amostras analisadas.

Primeiro registo da cigarrinha verde Asymmetrasca decedens (Homoptera: Cidadellidae) em Portugal continental

Asymmetrasca decedens, a polyphagous leafhopper widely distributed in Mediterranean region, is here reported as a new record to mainland Portugal. Heavy infestations of this species have been found associated with peach, apricot and plum orchards, as well as on Alnus glutinosa, in southern of Serra da Gardunha (Beira Interior Region). Typical symptoms, the so-called ‘hopperburn', with leaves turning yellow and curling their edges downwards before drying-out and shedding, were spotted. Both adults and immature forms cause direct injury and the species also has the ability to be a vector of European Stone Fruit Yellows (16RX-B), among other phytoplasmas. External morphological characteristics of A. decedens, illustration of the male genitalia and a brief description of leaf lesions on peach are presented, in order to enable its identification, since it has a great potential for spreading as a pest. Not only A. decedens reveals a significant resistance to conventional insecticides, which may hinder its control, but also it has a vast host range of economically important plants, like ornamental or fruit trees.

Asymmetrasca decedens, uma cigarrinha polífaga, largamente distribuída na região mediterrânica é aqui referenciada como um novo registo para Portugal continental. Importantes infestações desta espécie foram encontradas associadas a pomares de pessegueiro, damasqueiro e ameixeira e a amieiros (Alnus glutinosa), a sul da Serra da Gardunha, na região da Beira Interior. Foram observados os sintomas característicos, constituídos por folhas amareladas e enroladas nos bordos, viradas para baixo, antes de secarem e caírem. Quer os adultos quer as ninfas causam danos diretos nas plantas tendo a espécie também capacidade para ser vetora de fitoplasmas, entre os quais o European Stone Fruit Yellows (16RX-B). Neste artigo são apresentadas as características morfológicas externas de A. decedens, imagens da genitália masculina e uma descrição sucinta das lesões nas folhas de pessegueiro, de modo a permitir a sua identificação, na medida em que a espécie tem um elevado potencial de dispersão e de constituir populações com comportamento de praga. A. decedens apresenta uma significativa resistência aos inseticidas convencionais, o que pode dificultar o combate, tendo um vasto leque de hospedeiros entre culturas economicamente importantes, como fruteiras e plantas ornamentais.

Micobiota associada a adultos do escaravelho das palmeiras (hynchophorus ferrugineus) provenientes de Cascais, Portugal

O escaravelho vermelho das palmeiras, Rhynchophorus ferrugineus (Coleoptera: Dryophthoridae), é a mais importante praga de palmeiras em muitas regiões da Ásia, África e Europa. Foi assinalada pela primeira vez em Portugal em finais de Agosto de 2007 na Região do Algarve e de seguida noutras zonas do país. A descontrolada dispersão da praga e a sua elevada nocividade levaram a que se iniciasse em 2010 um programa de deteção de R. ferrugineus no concelho de Cascais com recurso a uma feromona de agregação com base em ferruginol. As capturas ocorreram a partir de Maio de 2011 e procedeu-se ao estudo da diversidade dos fungos filamentosos transportados pelos insetos recolhidos entre Julho e Novembro desse ano, tendo em vista o conhecimento da micobiota a eles associada. Em todos os insetos analisados detetou-se um número variável de espécies de fungos filamentosos e durante o período do estudo foram identificadas 59 espécies que surgiram associadas ao rostro/antenas, élitros, patas e amostras de órgãos internos. A maioria das espécies ocorre habitualmente como fitopatogénio ou como saprófita, sendo de referir a presença de Nalanthamala vermoesenii e de Thielaviopsis paradoxa, importantes agentes de doenças de palmeiras em Portugal, e espécies dos géneros Metarhizium e Paecilomyces.

The red palm weevil (RPW), Rhynchophorus ferrugineus (Coleoptera: Dryophthoridae) is one of the most severe pests of various palm species in many regions of Asia, Africa and Europe. In Portugal RPW was first detected in August 2007 in the Algarve Region and then in other areas of the country. Considering the uncontrolled spread of the pest and its high nocivity, a pest detection program was initiated in 2010 in the municipality of Cascais using traps baited with an aggregation pheromone based on ferruginol. RPW adults were firstly recorded in traps in May 2011 and insects caught in those traps between July and November were studied, with a view to analyze the mycobiota associated with them. In all the analyzed insects a variable number of molds were detected and during the study 59 species were identified associated with the rostrum/antennae, elytra, legs and internal organs. Most species are known as phytopathogens or saprophytes, being noted the presence of Nalanthamala vermoesenii and Thielaviopsis paradoxa, important agents of palm diseases in Portugal, and species of the genera Metarhizium and Paecilomyces.

Fatores de campo relacionados com defeitos sensoriais da cortiça

Wine bottle stoppers are the main bio-technological product obtained from cork. The 2,4,6-trichloroanisole (TCA) is considered the main responsible for “cork taint” in bottled wines. This study intent to prove the relation between TCA and mancha amarela-yellow spot (MA) and to identify field factors that can be related to the cork TCA presence. Cork planks with and without MA were collected from cork oak stands in ten different regions of the country and 15 variables were analyzed. Three samples were taken from each plank for TCA quantification. The results show that TCA and MA are significantly related and that the TCA level is higher in cork samples coming from stands with shrubs in the understorey.

As rolhas de cortiça são o produto tecnológico mais importante obtido a partir da cortiça. O 2,4,6-tricloroanisol (TCA) é considerado o principal responsável pelo “gosto a rolha” no vinho engarrafado. Este estudo tem como objetivo provar a relação entre TCA e mancha amarela-yellow spot (MA) e identificar os fatores de campo que possam estar relacionados com a presença de TCA na cortiça. Pranchas de cortiça com a presença do defeito MA e sem a presença de MA foram colhidas em dez regiões do país e 15 variáveis foram analisadas. De cada prancha foram retiradas três amostras para quantificação do TCA. Os resultados mostram que a presença de TCA e da MA estão significativamente relacionadas e que os valores de TCA são mais altos nas parcelas com matos do que nas parcelas sem matos.

Cancro do castanheiro na região do Minho: Estrutura populacional e variabilidade genética de populações de Cryphonectria parasitica

O cancro do castanheiro (Cryphonectria parasitica) é considerado um dos principais fatores de mortalidade de Castanea sativa. Introduzido em Portugal e com desenvolvimento epidémico conhecido a partir da década de 90, manifestou elevada agressividade e uma dispersão muito rápida, tendo, atualmente, distribuição generalizada nas regiões de produção de castanheiro. Os meios de luta químicos, culturais e físicos não são eficazes no combate do cancro do castanheiro e apenas a luta biológica por Hipovirulência tem mostrado ser eficaz na Europa. A disseminação dos hipovírus está diretamente relacionada com os grupos de compatibilidade vegetativa (VCType), pelo que existe a necessidade de estudar a estrutura populacional de C. parasitica e identificar os VCType presentes em cada souto. Avaliou-se a incidência e severidade do cancro do castanheiro em três soutos da região do Minho, tendo-se obtido isolados de C. parasitica que foram posteriormente caracterizados quanto ao VCtype e avaliada a variabilidade genética das diferentes subpopulações através de box-PCR. Os isolados obtidos nos três soutos pertencem a cinco VCtype diferentes sendo o mais representativo o EU-11 (62% dos isolados), seguindo-se o EU-2 (20%), EU-1 e EU- 66 (5,5%) e EU-12 (7%). Os padrões de bandas obtidos por box-PCR não parecem refletir a virulência, origem geográfica ou VCtype dos isolados.

Cryphonectria parasitica, the causal agent of chestnut blight, was considered one of the main factors of mortality of Castanea sativa. Introduced in Portugal in the 1990s, and with epidemic development, the disease has manifested high aggressiveness and a rapid dispersion. Currently it has a widespread distribution in the chestnut production regions. Chemical, physical and cultural control means are not effective to control Chestnut Blight and only biological control by hypovirulence has shown to be effective in Europe. The spread of the hypovirus is directly linked to the vegetative compatibility types (VCType) of the fungal populations, so there is a need to study the population structure of C. parasitica and identify the VCTypes present in each subpopulation. The incidence of Chestnut Blight was assessed in three chestnut groves in the Minho region, and the C. parasitica isolates obtained were further characterized. Each isolate was allocated to a VCType by matching with reference isolates, and the genetic variability of selected isolates was evaluated by BOX-PCR. The isolates obtained were functionally diverse comprising over five VCType, with EU-11 (62%), followed by EU-2 (20%), EU-1 e EU- 66 (5,5%) and EU-12 (7%). Banding patterns obtained by box-PCR fingerprinting did not reflect geographical origin or the VCType of the isolate.

Biodiversidade do solo em vinhas com e sem enrelvamento

O presente trabalho realizado no âmbito do projecto “EcoVitis: Maximização dos Serviços do Ecossistema Vinha na Região Demarcada do Douro” teve por objectivo avaliar a influência do enrelvamento natural, enrelvamento semeado e mobilização na entrelinha, na diversidade dos artrópodes do solo na vinha. A parte experimental decorreu na Quinta do Casal da Granja, propriedade da Real Companhia Velha. Procedeu-se ao levantamento florístico em cada uma das três modalidades de gestão do solo estudadas e à monitorização de artrópodes do solo com recurso a armadilhas pitfall, tendo sido realizadas cinco capturas entre os meses de Maio e Agosto. Identificaram-se 38 táxones pertencentes a 16 famílias, dos quais 29 táxones no enrelvamento natural, 27 no enrelvamento semeado e 25 no solo mobilizado. Capturaram-se 15235 artrópodes, pertencentes a 11 ordens e 1 classe. Verificou-se que o enrelvamento natural apresentou uma maior diversidade de espécies vegetais, o que está associado a uma maior diversidade de artrópodes. A maior abundância da ordem Coleoptera nesta modalidade de gestão do solo, em particular os pertencentes ao grupo funcional dos predadores, vem confirmar a importância do enrelvamento natural para a limitação natural de pragas da vinha, no Douro.

This work was part of the project "“EcoVitis: Maximização dos Serviços do Ecossistema Vinha na Região Demarcada do Douro” was aimed at evaluating the influence of natural and seeded cover crops and tillage between rows on the diversity of soil arthropods. The experiment took place at Quinta do Casal da Granja, property of the Real Companhia Velha. A floristic survey was performed to assess plant diversity, in each of the three modalities and soil arthropod diversity was measured using pitfall traps, between May and August of 2014. It was possible to identify 38 plant taxa belonging to 16 families, of which 29 in the natural cover crop, 27 in the seeded cover crop and 25 in the soil with tillage between rows. A total of 15235 arthropods were captured, that fit into 11 orders and one class. Natural cover crop presented a more balanced distribution between plant species, which is probably the reason for a higher diversity on arthropods. Coleoptera, especially species that are predators, was positively associated to natural cover crop, which is important for biological control in vineyards at the Douro region.

Controlo biológico do cancro do castanheiro: Deteção, identificação e caracterização do Hypovirus - CHV1

O cancro do castanheiro é provocado pelo fungo Cryphonectria parasitica é considerado a principal causa do declínio dos castanheiros na Europa. C. parasitica é um ascomiceta (Diaporthales) nativo do continente asiático. A infeção do castanheiro manifesta-se pelo aparecimento de necroses extensas na casca dos ramos e troncos, que resulta na morte dos castanheiros. A hipovirulência é um método seletivo de controlo biológico do Cancro do Castanheiro, trata-se de uma infeção do fungo C. parasitica com Cryphonectria hypovirus 1 (CHV1), um vírus de dsRNA não encapsulado do género Hypovirus. O controlo biológico com estirpes hipovirulentas é considerado um método eficaz no controlo da doença e promove a recuperação dos castanheiros. A aplicação necessita da produção em laboratório de estirpes hipovirulentas compatíveis com a estirpe virulenta presente no campo e a sua introdução na margem de cancros ativos. Neste estudo pretendeu-se detetar, identificar e caracterizar o hipovirus CHV1 com potencial para integrar programas de controlo biológico do Cancro do castanheiro em Portugal. Com a utilização de métodos moleculares foram identificados e caracterizados 11 hipovirus em isolados brancos de C. parasitica obtidos em cancros no nordeste de Portugal.

The chestnut blight caused by the fungus Cryphonectria parasitica is considered a major cause of the decline and disappearance of chestnut trees across Europe. C. parasitica is an ascomycete fungus (Diaporthales) that is native to eastern Asia. Infection of chestnut plants with this fungus is typically associated with extensive necrosis (cankers) of the bark on stems and branches, resulting in the subsequent death of the tree. Hypovirulence is a specific method for biological control of Chestnut Blight, it is an infection of C. parasitica with Cryphonectria hypovirus 1 (CHV1), a unencapsidate dsRNA virus of the genus Hypovirus. Biological control with hypovirulent strains is considered an efficient method to control the disease and improve the host plant recovery. The field application needs laboratorial production of compatible hypovirulent strain and introduction by inoculation at the margin of active cankers. In this work it was intended to identify and characterize the hypovirus with potential ability to integrate biological control programmes against Chestnut Blight. Using molecular techniques 11 hypovirus with hypovirulence potential were identified on white isolates of C. parasitica isolated on cankers from northeast of Portugal.

Natural spread of Hypovirulence in Cryphonectria parasitica: A case study, Sergude - Minho - Portugal

El castaño (Castanea sativa) es una especie de gran importancia económica y social en la región del Norte de Portugal. Uno de los mayores obstáculos en el aumento de la producción de castaña está relacionada con la presencia de factores bióticos como la antigua y conocida enfermedad de la Tinta y más recientemente con el chancro que provoca elevada mortalidad en los castaños. No hay sustancias químicas capaces de bloquear el desarrollo del chancro del castaño y todos los medios de lucha cultural mostraron baja eficacia. La hipovirulencia es el medio de lucha biológica y la manera más ventajosa para parar la enfermedad en Europa. El método mostro una elevada capacidad de cura en los chancros y la recuperación completa de los castaños atacados. El mecanismo molecular de hipovirulencia está asociado a la presencia en el hongo parasítico del virus dsRNA denominado Hypovirus (CHV). En Sergude (Minho) en una parcela con todos los árboles atacados por Cryphonectria parasitica se verifico en un periodo de 3 - 4 años la remisión natural de los chancros llevando a la recuperación de los árboles enfermos. Conocer los mecanismos implicados en la expresión de la hipovirulencia y los factores asociados a su dispersión natural fue el objeto de este trabajo. Se estudió la estructura poblacional de C. parasitica presente en la parcela así como la micoflora epifítica y endofítica asociada.

Chestnut (Castanea sativa) is a species of great economic and social importance in the Northern region of Portugal. One of the biggest barriers to increased nut production is related to the presence of biotic factors such as the old and familiar Ink Disease and more recently the Chestnut Blight that is causing high mortality in chestnut. In the absence of chemical fungicides capable of stopping the development of the Chestnut Blight and considering the reduced effectiveness of other mitigation measures, hypovirulence is the most advantageous way to control the disease in Europe. The method showed high ability to heal the cankers and promote the complete recovery of chestnut. The molecular mechanism of hypovirulence is associated with the presence of dsRNA virus of the genus Hypovirus. In Sergude (Minho) in a chestnut grove with all trees attacked by Cryphonectria parasitica in a period of 3-4 years occurred the natural remission of cankers leading to the recovery of diseased trees. Our objective was to understand the mechanisms involved in the expression of hypovirulence and factors associated with its natural dispersion. We studied the population structure of C. parasitica present in chestnut and associated epiphytic and endophytic mycoflora.