INTRODUÇÃO

O feijão-comum (Phaseolus vulgaris L.) é uma cultura agrícola de elevada importância económica e social no Brasil. Entre os diversos problemas de origem fitossanitários que limitam a produtividade dessa cultura, encontram-se nemátodes fitoparasitas, especialmente Meloidogyne spp. (nemátodes-das-galhas) e Pratylenchus spp. (nemátodes-das-lesões) (^{Cunha et al., 2015}; ^{Dadazio et al., 2016}).

Em áreas de cultivo de feijão, as espécies M. incognita e M. javanica são encontradas com maior frequência (^{Simão et al., 2010}). Os nemátodes-das-galhas são responsáveis por danos que podem atingir até 90% na qualidade e na produtividade da cultura, dependendo do nível populacional, da cultivar e das condições ambientais (Simão et al., 2010; ^{Singh e Schwartz, 2011}). Atualmente, M. enterolobii tem causado grande preocupação devido à sua elevada agressividade em diversas espécies vegetais (^{Brito et al., 2007}). Este nemátode também consegue quebrar a resistência de plantas portadoras do gene Mi-1 ou N, que conferem resistência a outras espécies de Meloidogyne (^{Bitencourt e Silva, 2010}).

A utilização de cultivares resistentes, é um dos principais métodos para o controlo de nemátodes fitoparasitas (^{Posse et al., 2010}). Sendo assim, fontes de resistência precisam ser identificadas e quantificadas para utilização de novas variedades que possam reduzir o ciclo biológico do nemátode, tentando manter a população abaixo do limiar de dano econômico. A identificação de genótipos de feijoeiro resistentes, tolerantes ou imunes a nemátodes fitoparasitas pode ser explorada em programas de melhoramento de plantas, visando aumentar a tolerância ou a resistência ao ataque desses nemátodes e viabilizar o cultivo desta leguminosa em áreas infestadas (^{Baida et al., 2011}; ^{Bozbuga et al., 2015}).

Em diversos relatos, a variação de resistência entre genótipos de feijão aos nemátodes-das-galhas tem sido comprovada, demonstrando que um mesmo genótipo de feijoeiro pode reagir de forma diferenciada a diferentes espécies de Meloidogyne. A reação de resistência dos genótipos FORT-10, FORT-13, FORT-16 e Aporéa M. incognita, bem como a suscetibilidade dos feijoeiros Rico-23, Pérola e ‘FORT-19’ a este nemátode, foram comprovadas em estufa (^{Santos et al., 2012}). Para M. javanica, ^{Singh et al. (2011}) não detectaram nenhuma fonte de resistência nas cultivares e genótipos de feijoeiro avaliadas. A divergência de comportamento entre genótipos de feijoeiro aos NGR foi relatada noutro estudo, em que os genótipos HAB 402, HAB 408, HAB 411 e HAB 428 apresentaram resistência simultânea a M. incognita e M. javanica e a genótipos HAB 403 mostrou-se suscetível a ambas (^{Baida et al., 2011}). ^{Bozbuga et al. (2015}) ao avaliarem a reação de 87 genótipos de feijoeiro a M. incognita, verificaram que apenas treze eram resistentes.

Diante desse contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a reação de sete genótipos de feijoeiro a M. incognita, M. javanica e M. enterolobii.

MATERIAL E MÉTODOS

Três ensaios foram conduzidos em estufa. Cada ensaio foi repetido, para confirmação dos dados. Durante a condução dos ensaios, a média das temperaturas na estufa foi de 23,5 ºC e 28,0 ºC, nas repetições 1 e 2, respectivamente.

Em todos os ensaios, o delineamento experimental foi inteiramente casualizado com cinco repetições, sendo avaliado, respectivamente, a reprodução de M. incognita, M. javanica e M. enterolobii em sete genótipos (PR11-6-4-1-2, Pr11-6-4-1-2, C4-8-1-1, C2-1-6-1-1, IAC-Alvorada, IAC-Diplomata e IAC-Una) de feijoeiro.

Populações puras das espécies estudadas foram identificadas pelo padrão perineal das fêmeas e electroforese de isoenzimas (^{Oliveira et al., 2012}) e multiplicadas, separadamente, em plantas de tomateiro, Solanum lycopersicum, cv. Rutgers. As sementeiras foram realizadas diretamente em vasos de polietileno com capacidade de 2000 dm³ contendo uma mistura de solo (franco-argiloso), areia e matéria orgânica (1:2:1), autoclavadas (120°C, 1 atm, durante 2 h). O desbaste manual foi efetuado após a emergência das plântulas, deixando uma por vaso. Cada vaso foi inoculado com 5.000 ovos + J2 de M. incognita, M. javanica ou M enterolobii, obtidos pelo método de ^{Hussey e Barker (1973}) modificado por Boneti e Ferraz (1981). Depositou-se a suspensão de ovos + J2 em dois orifícios com 3 cm de profundidade na rizosfera de cada planta. O tomateiro cv. Rutgers foi utilizado como controlo uma vez que é susceptível às espécies estudadas.

Sessenta dias após a inoculação os sistemas radiculares das plantas foram lavados individualmente sob água corrente, pesados após a retirada do excesso de água com papel filtro e submetidos à coloração com Floxina B (^{Daykin e Hussey, 1985}) para facilitar a contagem das massas de ovos. Os índices de galhas (IG) e de massas de ovos (IMO) foram obtidos de acordo com a escala de ^{Taylor e Sasser (1978}) e classificados em: 0 (sem galhas ou massas de ovos); 1 (1 a 2 galhas ou massas de ovos); 2 (3 a 10 galhas ou massas de ovos); 3 (11 a 30 galhas ou massas de ovos); 4 (31 a 100 galhas ou massas de ovos) e 5 (mais de 100 galhas ou massas de ovos) por raiz. Em seguida, os sistemas radiculares foram processados (^{Coolen e D’Herde, 1972}) numa solução de hipoclorito de sódio a 0,5%, e trituradas num liquidificador.

O número final de ovos e jovens na suspensão final foi determinado com o auxílio da lâmina de Peters observada ao microscópio de luz. Esse número foi utilizado para se obter o fator de reprodução (população final do nemátode (Pf)/ população inicial (Pi)). Plantas com FR igual ou maior que 1,0 foram consideradas suscetíveis (S) e menores que 1,0, resistentes (R) (^{Oostenbrink, 1966}).

Os resultados da variável FR foram transformados através de para cumprir os pressupostos da distribuição normal. Os dados foram analisados pelo programa SISVAR (^{Ferreira, 2011}) e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade de erro.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Quanto à reação dos genótipos de feijoeiro a M. incognita, M. javanica e M. enterolobii, foi possível observar variações de comportamento entre os genótipos a estas espécies de nemátodes, adotando-se por base o FR (Quadros 1, Quadro 2 e Quadro 3). O tomateiro cv. Rutgers, utilizado como controlo, apresentou FR acima de 16,0, comprovando a viabilidade do inóculo utilizado.

Ao avaliar a reação dos sete genótipos de feijoeiro a M. incognita, verificou-se que os genótipos C2-1-6-1-1, Pr11-6-4-1-2, IAC-Diplomata, IAC-Alvorada e IAC-Una foram suscetíveis a M. incognita no ensaio 1 (Quadro 1). Resultados confirmados no ensaio 2. Estes genótipos permitiram o aumento da população inicial do nemátode, com FR variando entre 1,3 e 5,8, no primeiro ensaio, e 3,6 a 15,5, no segundo. O genótipo IAC-Una (FR= 5,8) no ensaio 1, apresentou o FR mais elevado, seguido pelo IAC-Alvorada (FR= 5,6), não havendo diferença significativa entre si, mas, diferindo estatisticamente dos demais genótipos avaliados. No entanto, no ensaio 2, apenas o feijoeiro IAC-Alvorada (FR= 15,5) diferiu estatisticamente dos outros genótipos testados. O genótipo C4-8-1-1 mostrou-se resistente a M. incognita nos ensaios 1 e 2, com FR de 0,6 e 0,7, respectivamente. O genótipo PR11-6-4-1-2 apresentou divergência de comportamento, mostrando-se resistente a M. incognita no primeiro ensaio e suscetível no segundo. O IG e o IMO variaram de 1,6 a 3,0 e de 0,4 a 3,0 no ensaio 1, enquanto no ensaio 2, a variação foi de 0,6 a 3,2 e de 0 a 2,2, respectivamente.

Os resultados do estudo da reação dos genótipos de feijoeiro a M. javanica (Quadro 2), mostraram que apenas C2-1-6-1-1 foi resistente, com FR de 0,1 e 0,7, nos ensaios 1 e 2, respectivamente. Os demais feijoeiros proporcionaram o aumento da população inicial do M. javanica, com FR variando de 1,2 (IAC-Diplomata) a 18,4 (IAC-Una). Entre os feijoeiros suscetíveis, os FR mais baixos foram encontrados em IAC-Diplomata (FR= 1,2), IAC-Una (FR= 1,3) e IAC-Alvorada (FR= 2,3) diferindo estatisticamente do feijoeiro C2-1-6-1-1 (FR= 0,19). No ensaio 2, IAC-Diplomata (4,0) e IAC-Alvorada (6,7) também se encontram no grupo de genótipos que apresentaram os FR mais baixos, sendo que C4-8-1-1 (4,6) e PR11-6-4-1-2 (1,4) também estão neste grupo. O FR mais elevado no ensaio 1, foi obtido no feijoeiro Pr11-6-4-1-2 (FR= 9,7), que estatisticamente, diferiu dos demais genótipos estudados. Contudo, no ensaio 2 o FR mais elevado foi observado no feijoeiro IAC-Una (FR= 18,4), o qual não diferiu estatisticamente do genótipo Pr11-6-4-1-2. As variáveis IG e IMO, no primeiro ensaio, variaram ambas de 0 a 3,8 e no segundo ensaio variaram de 1,4 a 4,4 e de 0,8 a 1,8.

Quanto à multiplicação de M. enterolobii nos genótipos de feijoeiro (Quadro 3), IAC-Una apresentou comportamento contraditório, sendo resistente no ensaio 1 e suscetível no ensaio 2. Os demais genótipos foram suscetíveis ao M. enterolobii com FR variando de 1,4 (IAC-Diplomata) a 15,5 (IAC-Alvorada), havendo diferença estatística entre si. Os genótipos Pr11-6-4-1-2 (FR= 5,6) e IAC-Alvorada (FR= 15,5) apresentaram os FR mais elevados nos ensaios 1 e 2, respectivamente. O IG e o IMO variaram ambos de 0,8 a 3,2 no ensaio 1, e no segundo ensaio, de 2,4 a 4,2 e de 2,2 a 3,8, respectivamente.

A variação de comportamento dos genótipos de feijoeiro a M. incognita, M. javanica e M. enterolobii, verificada neste estudo, aponta a importância do conhecimento da reação de diferentes genótipos para que sejam indicados com segurança para o uso em campos infestados com estes nemátodes ou para serem utilizadas em programas de melhoramento genético. ^{Juliatii et al. (2010}) ao estudarem a reação de 52 genótipos de feijoeiro a M. incognita, M. javanica e M. paranaensis, verificou-se que apenas os acessos IAPAR 57, IAPAR 72 e Bambuí foram simultaneamente resistentes a estes nemátodes. As cultivares ‘Macarrão Atibaia’, ‘Macarrão Preferido’, ‘Macarrão Trepador’, ‘Talismã’ e ‘Ouro negro’ foram resistentes a M. javanica e M. incognita e suscetibilidade a M. enterolobii, enquanto ‘Aporé’ foi resistente as três espécies de Meloidogyne (^{Ferreira et al., 2010}; Melo et al., 2011). Os genótipos de feijão ‘HAB 402’, ‘HAB 408’, ‘HAB 411’ e ‘HAB 428’ apresentaram resistência simultânea a M. incognita e M. javanica, enquanto ‘HAB 403’ mostrou-se suscetível a ambos os nemátodes (^{Baida et al., 2011}). Estudos de reação de feijoeiro a M. incognita e M. javanica, verificaram resistência nos genótipos ‘FORT-10’, ‘FORT-13’, ‘FORT-16’ e ‘Aporé’ e suscetibilidade em ‘Rico-23’, ‘Pérola’ e ‘FORT-19’ (^{Santos et al., 2012}). Ao se avaliar 87 genótipos de feijão frente a multiplicação de M. incognita, constatou-se que apenas as treze cultivares resistentes ao nemátode-das-galhas (^{Bozbuga et al., 2015}). As divergências relatadas na literatura sobre o patossistema feijoeiro- nemátode, demonstram que o conhecimento da reação de novos genótipos aos nemátodes é necessário.

Os genótipos ‘C2-1-6-1-1’, ‘Pr11-6-4-1-2’, ‘IAC-Diplomata’, IAC-Alvorada e IAC-Una foram suscetíveis a M. incognita. Estes resultados mostram que a utilização destes genótipos em áreas infestadas com esta espécie de Meloidogyne pode aumentar as populações do nemátode, inviabilizando áreas de produção agrícola. No entanto, o genótipo C4-8-1-1 foi resistente a M. incognita, com FR > 1,0 nos ensaios 1 e 2. A resistência a M. incognita dos feijoeiros Diamante Negro, Varressai e Goitacazes e de outros nove genótipos foi demonstrada em estufa (^{Juliatii et al., 2010}). A resistência de seis genótipos Hav 06, Hav 11, Hav 28, Hav 50, Hav 69 e Torino em relação a M. javanica e M. paranaenses foi comprovada em estufa (^{Baida et al., 2011}). Embora o IG, determinado pela escala de infecção (1 a 5), ter sido utilizado apenas como um parâmetro auxiliar para indicar a reação dos sintomas nas plantas, foi possível observar que os genótipos testados apresentaram IG relativamente baixos, variando de 0,6 a 3,2, mesmo aqueles favoráveis à multiplicação do nemátode como, por exemplo, IAC-Alvorada que apresentou IG de 3,2 e FR de 15,5. Isto demonstra que parte da população de M. incognita presente no solo penetrou e estabeleceu-se na planta, embora os genótipos não tenham respondido de forma expressiva a este nemátode. Tal fato demostra que o índice de galhas não deve ser utilizado como parâmetro principal na avaliação de resistência desta cultura, podendo ser utilizado apenas como auxiliar na interpretação dos dados finais. O IMO também deve ser utilizado com cuidado, pois, todos os genótipos suscetíveis apresentaram IMO relativamente baixo como foi o caso, principalmente, dos genótipos IAC-Alvorada, Pr11-6-4-1-2 e IAC-Diplomata que apresentaram IMO de 1,0, 0,8, 0,6 e o FR de 15,5, 4,0 e 4,0, respectivamente.

Os dados relativos à multiplicação de M. javanica, apontam que apenas o genótipo C2-1-6-1-1 foi resistente a M. javanica, sendo os demais, favoráveis ao aumento populacional do nemátode. A resistência e suscetibilidade de genótipos de feijoeiro ao parasitismo de M. javanica também foi verificado em outros estudos. Os genótipos Ônix, Jalo precoce, Ouro branco, Emgopa 201 Ouro, Aporé e outras 20 comportaram-se como resistentes, tendo por base o FR do nemátode (^{Juliatii et al., 2010}). Os genótipos IAPAR 81, IAPAR 14, Pérola e outros oito foram suscetíveis a M. javanica em estufa (^{Simão et al., 2010}).

Quanto à multiplicação de M. enterolobii nos genótipos de feijoeiro, foi constatado que IAC-Una apresentou comportamento contraditório, resistente em um dos ensaios e suscetível no outro.

Os valores das variáveis IG, IMO e FR das três espécies de Meloidogyne foram mais baixos nos ensaios 1, em comparação com os ensaios 2, sugerindo que temperaturas mais amenas durante a execução destes (média de 23,5ºC no ensaio 1 e 28ºC no 2), podem ter contribuído para isto, visto que os nemátodes parasitas de plantas têm o seu ciclo biológico alterado em função da temperatura.

Nenhum genótipo de feijoeiro apresentou resistência às três espécies de Meloidogyne estudadas. Isto demonstra a importância do conhecimento das espécies presentes e do nível de infestação da área, visto que genótipos com resistência a uma espécie de Meloidogyne, não apresentam necessariamente, resistência a outras espécies. A ausência de resistência simultânea em feijoeiro também foi verificada nos estudos de ^{Ferreira et al. (2010}) e Melo et al. (2011). Tais resultados também apontam que em áreas infestadas com mistura de M. incognita, M. javanica e M. enterolobii, o cultivo sucessivo desses genótipos com culturas hospedeiras, como tomate, pepino e pimentão, aumenta a população de nemátodes no solo, o que pode levar à queda da produção.

Os resultados obtidos, sugerem que os feijoeiros C4-8-1-1 e C2-1-6-1-1 podem ser indicados para o plantio em áreas de cultivo infestadas com M. incognita e M. javanica, respectivamente. Tais genótipos também podem ser utilizados como fontes de resistência para o uso em programas de melhoramento genético.