MOTA, Mariana    OLIVEIRA, Cristina Moniz. Identificação de genes expressos durante a interacção cv. Florina - V. inaequalis por differential display-Rt-Pcr . []. , 31, 2, pp.139-147. ISSN 0871-018X.

^lpt^aPara identificar genes especificamente regulados durante a expressão do mecanismo de resistência ao pedrado na macieira cv. Florina, comparou-se o padrão de expressão genética em plantas após inoculação com uma suspensão conidial do fungo Venturia inaequalis, com o padrão em plantas inoculadas com água, por “differential display RT-PCR”. Os produtos das reacções de amplificação resultantes da combinação de um oligodT (dT_VG) com 20 iniciadores decameros de sequência arbitrária foram separados em gel desnaturante de poliacrilamida e detectados com nitrato de prata. 14 fragmentos de cDNA visíveis apenas na amostra derivada de folhas inoculadas com a suspensão, ou em maior abundância nesta amostra, foram extraídos do gel para purificação, reamplificação e clonagem. Três fragmentos foram já sequenciados, revelando uma sequência forte homologia com uma fitoquelatina sintetase vegetal, potencialmente envolvida em respostas a factores de “stress”. A acumulação diferencial deste cDNA em resposta à inoculação será verificada por transcrição-reversa-PCR com iniciadores específicos.^len^aIn order to identify genes that are specifically regulated during the expression of the resistance mechanism of the apple cv. Florina towards the apple scab fungus, the genetic expression pattern in plants inoculated with a conidial suspension of Venturia inaequalis was compared with the expression pattern in plants inoculated with water, by differential display RT-PCR. Amplified products derived from the combination of one oligodT (dT_VG) with 20 10-mer primers were separated in polyacrylamide denaturing gel and detected with silver nitrate. 14 cDNA fragments that were only visible in the sample inoculated with fungal suspension, or more abundant in this one, were purified from the gel for reamplification and cloning. Three fragments were already sequenced and one sequence showed very strong homology with a plant phytochelatin synthetase, that might be involved in stress responses. Differential accumulation of this cDNA upon fungal inoculation shall be verified by reverse-transcription PCR with specific primers.

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