SERENO, Jose et al. Different pathways and biomarkers of acute and chronic cyclosporineinduced nephrotoxicity in a rat model: focus on overexpression of mTOR and Mki67. []. , 27, 3, pp.197-208. ISSN 0872-0169.

^len^aCalcineurin inhibitors, in particular Cyclosporin A (CsA), remains the cornerstones of immunosuppressive regimens in many transplantation centres worldwide, regardless of drug-induced nephrotoxicity. The pathogenesis of CsA-induced nephropathy remains to be fully elucidated, but seems to be affected by the duration of drug exposure. This study aimed to clarify the molecular pathways involved in acute and chronic CsA-induced nephrotoxicity, focusing on serum, urinary and renal markers. The study comprised 24 male Wistar rats, divided in two models: acute and chronic CsA (5 mg/Kg bw/day) exposure (3 vs 9 weeks) vs matched control groups. The following data was evaluated: blood pressure and heart rate; serum total and non-HDL cholesterol, glucose and insulin; serum and urine creatinine, blood urea nitrogen (BUN), clearances and glomerular filtration rate (GFR); serum, urine and kidney tissue lipid peroxidation, via malondialdehyde (MDA); kidney mRNA expression of proliferative markers (PCNA, TGF-β1, mTOR and Mki67); kidney lesions. CsA has promoted hypertension and tachycardia, which were aggravated with the duration of exposure. Creatinine and BUN clearance and GFR showed early renal dysfunction, accompanied by increase serum creatinine (p<0.05) and BUN (p<0.01) levels, as well as kidney lipid peroxidation (p<0.05), which worsened with chronic exposure. Renal lesions were evident only after the chronic treatment. However, acute CsA exposure induced PCNA and TGF- β1 kidney mRNA up-regulation (p<0.05), unchanged mTOR and down-regulation of Mki67, while chronic treatment revealed a normalized PCNA and TGF- β 1 expression, accompanied by prominent mTOR and Mki67 up-regulation (p<0.01). In conclusion, CsA-induced nephrotoxicity is aggravated over time and distinct mechanisms and markers are involved in acute and chronic exposure. Chronic nephrotoxicity is accompanied with intense overexpression of mTOR and Mki67. These findings reinforce the rationale for early substitution of CsA by less nephrotoxic agents, being mTOR inhibitors a validated choice, in order to prevent chronic CsAinduced nephrotoxicity^lpt^aIntrodução: Os inibidores da Calcineurina, em particular a Ciclosporina (CsA), continua a ser um dos pilares da terapêutica imunossupressora em muitos centros de transplantação por todo o mundo, não obstante a nefrotoxicidade a eles associada. A patogénese da nefropatia induzida pela CsA ainda permanece por elucidar completamente, mas sabe-se que e afetada pelo tempo de exposição ao fármaco. Este estudo teve como objetivo esclarecer as vias moleculares envolvidas na nefrotoxicidade aguda e cronica induzidas pela CsA, com especial enfoque em marcadores séricos, urinários e renais. Grupos e métodos: O estudo envolveu 24 ratos Wistar machos, divididos em dois modelos: exposição aguda e cronica (3 vs 9 semanas) a CsA (5 mg/kg de peso corporal/dia) versus respectivos grupos controlo. Foram avaliados os seguintes parâmetros: pressão arterial e frequência cardíaca; colesterol total e colesterol não-HDL, glicose e insulina sericas, creatinina e azoto ureico em soro e urina, clearances e taxa de filtração glomerular (GFR), peroxidação lipídica em soro, urina e rim (medição de malondialdeido); quantificação do mRNA renal de marcadores de proliferação (PCNA, TGF-β1, mTOR e Mki67); avaliação histomorfologica. Resultados: A CsA promoveu hipertensão e taquicardia, que foram agravadas com a duração da exposição. Os valores das clearance de creatinina e azoto ureico e da GFR mostraram disfunção renal precoce, acompanhada por um aumento dos níveis de creatinina serica ( p<0,05) e azoto ureico (p<0,01), assim como de peroxidação lipídica no rim (p<0,05), que se agravaram com a exposição cronica. As lesões renais foram evidentes somente apos o tratamento cronico. Contudo, a exposição aguda a CsA induziu a sobreexpressão do mRNA de PCNA e de TGF- β1 a nível renal (p <0,05), sem alteração de mTOR e com redução da expressão do Mki67. O tratamento cronico revelou níveis normalizados de mRNA de PCNA e de TGF-β1, acompanhados por uma notória sobreexpressão renal de mTOR e de Mki67 (p< 0,01). Conclusão: A nefrotoxicidade induzida por ciclosporina e agravada com o tempo e existem mecanismos e marcadores distintos para a exposição aguda e cronica a CsA. A nefrotoxicidade cronica e acompanhada de intensa sobreexpressão de mTOR e de Mki67. Estes resultados reforçam a necessidade da substituição precoce de CsA por agentes menos nefrotoxicos, podendo os inibidores da mTOR ser uma escolha valida, a fim de prevenir a nefrotoxicidade cronica induzida pela ciclosporina

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