Caracterização Molecular de Proveniências de Pinus pinea L. por RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)¹

 

Isabel Evaristo *³, Rita Costa Seabra**, José Baeta*** e Maria Salomé Pais****

* Assistente de Investigação

Estação Florestal Nacional. Departamento de Silvicultura e Produtos Florestais

**Investigador Auxiliar, ***Assessor Principal

Estação Florestal Nacional. Departamento de Ecofisiologia e Melhoramento Florestal. Quinta do Marquês, Av. da República 2780-159 OEIRAS

****Professora Catedrática

Faculdade de Ciências da Universidade de Lisboa. Departamento de Biologia Celular e Biotecnologia Vegetal. Campo Grande, 1749-016 LISBOA

 

 

Sumário. Em 1993 a Estação Florestal Nacional estabeleceu, em Sines, um ensaio com 25 proveniências de pinheiro manso. Foram utilizadas sementes oriundas de sete países da Bacia Mediterrânica: Portugal, Espanha, Itália, Grécia, Marrocos, Turquia e Israel. De cada proveniência foram plantadas 25 árvores, repetidas por seis blocos casualisados o que perfaz um total de 3750 árvores numa área de 0,75 ha.

Das 25 proveniências, foram seleccionadas 22, para estudos de caracterização molecular através de análise de RAPD². Os perfis de RAPD obtidos, utilizando quinze primers, revelaram cerca de 51,5% de bandas polimórficas.

A análise estatística revelou que, das 22 proveniências analisadas, 12 são muito próximas, constituindo um grupo central, com provável origem comum, não sujeita à selecção resultante de melhoramento florestal. As restantes 10 proveniências, situam-se em 3 grupos diferentes, sugerindo que tenham sido seleccionadas a partir dos indivíduos do grupo central. O valor mais elevado de diversidade genética foi obtido para as proveniências italianas enquanto que o valor mais baixo foi obtido para as proveniências portuguesas.

Palavras-chave: diversidade genética; distância genética; pinheiro manso; marcadores moleculares

 

Abstract. In 1993, "Estação Florestal Nacional" set up an experiment at Sines, with 25 stone pine provenances. Seeds from seven countries from the natural Mediterranean basin were used: Portugal, Spain, Italy, Greece, Morocco, Turkey and Israel. A total of 3750 trees were planted, 25 trees from each provenance, in six randomly repetitive blocks in an area of 0.75 ha.

We selected 22 of the 25 provenances for molecular characterisation by RAPD. The RAPD profiles revealed about 51.5% of polymorphic fragments with 15 different primers. The statistical analyses revealed that twelve of the 22 provenances tested were very close, constituting a central group, probably with a common origin, not subjected to selection resulting from a breeding programme. The other ten provenances fall into three different groups, suggesting that they had been selected from the central group. The highest genetic diversity value was found in the Italian provenances, while the lowest value was found in the Portuguese provenances.

Key words: genetic diversity; genetic distance; stone pine; molecular markers

 

Résumé. En 1993, la "Estação Florestal Nacional" a implanté, à Sines, un essai avec 25 provenances de pin pinier. Des lots de graines originaires de sept Pays Méditerranéens ont été utilisés: Portugal, Espagne, Italie, Grèce, Maroc, Turquie et Israël. De chaque provenance 25 arbres ont été plantés par bloc, avec six répétitions ce qui représente un total de 3750 arbres en 0.75 ha. Parmi les 25 provenances 22 ont été sélectionnées pour la caractérisation moléculaire par RAPD. Les RAPD obtenus, en utilisant 15 oligonucléotides initiateurs (primers), ont révélé près de 51.5% de polymorphisme.

L'analyse statistique a démontré que des 22 provenances analysées 12 sont très semblables et constituent un groupe central probablement avec une origine commune non soumise à la sélection résultante de l'amélioration génétique forestière. Les dix autres provenances sont distribuées en trois groupes différents, ce qui nous porte à croire qu'elles aient été sélectionnées, dans le groupe central. La teneur la plus élevée en diversité génétique a été signalée pour les provenances italiennes et, la plus basse pour les Portugaises.

Mots clés: diversité génétique; distance génétique; pin pinier; marqueurs moléculaires

 

 

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Submetido para publicação em Março de 2002

Aceite para publicação em Maio de 2002

 

 

¹Este trabalho foi realizado no âmbito do projecto PIDDAC "Caracterização molecular de genótipos seleccionados de pinheiro manso para o controlo da qualidade de pinhão"

² Abreviaturas: AFLP (Amplified Fragment Lenght Polymorphism) cpSSR (Chloroplast Single Sequence Repeats); PCR (Polymerase Chain Reaction); RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA); uv (ultra violeta)

³ 1º Autor E-email: isabel.evaristo@efn.com.pt