Um método eficiente para a detecção de Phytophthora cinnamomi associada com a Doença da Tinta do Castanheiro na rizosfera de Castanheiro (Castanea sativa Mill.)

An efficient assay for detection of Phytophthora cinnamomi in the rhizosphere of Sweet Chestnut (Castanea sativa Mill.)

E. Gouveia¹, V. Coelho, N. Sousa, S. Coutinho, L. Nunes & Maria Loreto Monteiro

 

RESUMO

O ciclo biológico de Phytophthora cinnamomi Rands e P. cambivora (Petri) Buisman espécies associadas com a Doença da Tinta do Castanheiro, ocorre integralmente no ambiente solo. A presença de qualquer uma destas espécies parasitas inviabiliza as novas plantações de castanheiro e coloca sérios problemas à manutenção dos soutos já instalados. Para garantir a ausência de propágulos dos parasitas no material de multiplicação do castanheiro e avaliar o estado sanitário dos solos é necessário que os métodos de detecção sejam sensíveis e rápidos, o que nem sempre é conseguido com as espécies de Phytophthora cujo ciclo de vida ocorre no ambiente solo. Neste estudo desenvolveuse e optimizou-se um método de biodetecção conjugado com a utilização de meios de cultura selectivos. Como material biológico utilizaram-se discos de folha de castanheiro (Castanea sativa), azevinho (Ilex aquifolium) e camélia (Camellia japonica), em condições de temperatura constante (25º) e em condições normais de laboratório com a adição ou não de biocidas (pimaricina e penicilina) na água de diluição do solo. Os discos de folha de castanheiro foram mais eficientes na detecção de Phytophthora, obtendo-se maior percentagem de isolamentos positivos no meio de cultura selectivo (P10VPH). Os resultados obtidos neste estudo permitiram estabelecer um protocolo experimental de fácil utilização e tornar mais eficiente a detecção de Phytophthora cinnamomi associada com a Doença da Tinta do Castanheiro.

 

ABSTRACT

The life cycle of Phytophthora cinnamomi Rands and P. cambivora (Petri)Buisman, both species associated with Ink Disease of Chestnut, occurs entirely in soil. The presence of any of these parasitic species is a limiting constraint for new plantations of sweet chestnut and represents a serious problem for established groves. Sensitive and fast detection methods are necessary to guarantee the absence of inoculum in the propagation material and to evaluate the sanitary condition of soils. In this study a method that involved a baiting assay conjugated with selective agar medium was developed. As biological baits, leaf discs of sweet chestnut (Castanea sativa), holly trees (Ilex aquifolium) and camellia (Camellia japonica) were used, at 25 ºC and normal laboratory conditions with or without addition of biocides (pimaricin and penicillin) in the water of soil dilution. The leaf discs of sweet chestnut were more efficient for detection of Phytophthora and greater percentage of positive isolations were always obtained in the selective medium P10VPH. Results of this study allow us to establish an efficient protocol for detection of P. cinnamomi associated with Ink Disease of Chestnut in the rhizosphere of sweet chestnut.

 

Texto completo disponível apenas em PDF.

Full text only available in PDF format.

 

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Anselmi, N., Giordano, E., Vannini, A., Troiani, L., Napoli, G., Crivelli L. 1996. Il mal dell’inchiostro del castagno in Italia: una vecchia malattia ritorna attuale. Linea Ecologica, 5 (27): 39-44.

Bolay, A. 1992. Les dépérissements des arbres frutiers dus à des champignos du genere Phytophthora en Suisse Romande et au Tessin. Revue Suisse Viticulture Arboriculture Horticulture, 24 (5): 281-292.

Bonants P. J. M., Gent-Pelzer, M. P. E., Hooftman, R., Cooke, D. E. L., Guy, D. C. and Duncan, J. M. 2004. A combination of baiting and different PCR formats, including measurement of real-time quantitative fluorescence, for the detection of Phytophthora fragariae in strawberry plants. European Journal of Plant Pathology, 110: 689-702.

Cahill, D. M. and Hardham, A. R. 1994. A dipstick immunoassay for the specific detection of Phytophthora cinnamomi in soils. Phytopathology, 84: 1284-1292.

Camerom, J. N. and Carlile, M. J. 1977. Negative geotaxis of zoospores of the fungus Phytophthora. Journal of General Microbiology, 98: 599-602

Carlile, J. M. 1987. Motility, taxis and tropism in Phytophthora. In: D. C. Erwin, S. Bartnicki-Garcia, P. H. Tsao (Eds.), Phytophthora its Biology, Taxonomy, Ecology, and Pathology. APS Press: 95-107.

Crandall, S. B. 1950. The distribution and significance of the chestnut root rot Phytophthoras, P. cinnamomi and P. cambivora. Plant Disease Reporter, 34 (6): 194-196.

Dance, M. H., Newhook, F. J., Cole, J. S. 1975. Bioassay of Phytophthora spp. in soil. Plant Disease Reporter, 59: 523-527. (Cit: Tsao, 1987).

Eckert, J. W., Tsao, P. 1962. A selective antibiotic medium for isolation of Phytophthora and Phythium from plant roots. Phytopathology, 52: 771-777.

Erwin, C. & Ribeiro, K. 1996. Phytophthora Diseases Worldwide. The American Phytopathological Society. St Paul, Minnesota. APS Press.

Fernandes, C. T. 1966. A “Doença da Tinta“ dos castanheiros. Parasitas do género Phytophthora de Bary. Direcção Geral dos Serviços Florestais e Aquicolas, Alcobaça.

Gouveia, M. E. 2004. Métodos moleculares na identificação, caracterização e detecção de Phytophthora cambivora (Petri) Buisman e Phytophthora cinnamomi Rands associadas com a doença da tinta do castanheiro. UTAD, Vila Real.

Grente, J. 1961. La maladies de l'encre du chataignier. I-Étiologie et biologie. Annual Epiphyties, 12 (1): 6-24.

Grente, J. 1978. Les maladies du châtaignier. In Bergougnoux, F., Verlhac, A., Breisch, H., Chapa, J. (Eds.) Le chataignier. Production et culture. Journées Nationales du Chataignier de Brive -Malemort, Nov. 1978.

Nechwatal, J., Schlenzig, A. Jung, T., Cooke, D. E. L., Duncan, J. M. and Oswald, W. F. 2001. A combination of baiting and PCR techniques for the detection of Phytophthora quercina and P. citricola in soil samples from oak stands. Forest Pathology, 31: 85-97.

Newhook, F. J., Young, B. R., Allen, S. D., Allen, R.N. 1981. Zoospore motility of Phytophthora cinnamomi in particulate substrates. Phytopathologishe Zeitschrift, 101: 202-9.

Pimentel, A. L. 1947. A Phytophthora cinnamomi Rands, um outro agente, extremamente virulento, da “doença da tinta” do castanheiro. Separata da Agronomia Lusitana, Volume IX, Tomo III.

Shew, H. D., Benson, D. M., Grand, L. F. 1979. A comparison of baits for isolating Phytophthora cinnamomi from soil. (Abstr.) Phytopathology, 69: 532. (cit: Tsao, 1987).

Sokal, R. S., & Rohlf, F. J. 1995. Biometry, Ed. 3. W. H. Freeman, New York.

Tsao, H. P. & Guy, O. S. 1977. Inhibition of Mortierella and Pythium in a Phytophthora isolation medium containing hymexazol. Phytopathology, 67: 796-801.

Tsao, H. P. 1970. Selective media for isolation of pathogenic fungi. Annual Review. Phytopathology, 8: 157-186.

Tsao, H. P. 1987. Factors affecting isolation and quantification of Phytophthora from soil. In: D. C. Erwin, S. Bartnicki-Garcia, P. H. Tsao (Eds.) Phytophthora its Biology, Taxonomy, Ecology, and Pathology. APS Press : 219-236.

Tsao, H.P. 1990. Why many Phytophthora root rots and crown rots of tree and horticultural crops remain undetected. Bulletin OEPP/EPPO, 20:11-27.

Tucker, C. M. 1931. Taxonomy of the genus Phytophthora de Barry. Missouri Agricultural. Expérimental. Station. Research. Bulletin., 153. Cit: Grente, J. 1961. La maladies de l'encre du chataignier. I-Étiologie et biologie. Ann. Epiphyties, 12 (1): 6-24.

Turchetti, T. and Maresi, G. 2000. Effects of diseases on chestnut orchards and forest ecosystems. Ecologia Mediterrânea, 26 (1-2): 113-121.         [ Links ]

Urquijo Landaluze, P. 1947. Revisión taxonómica de los hongos productores de la enfermedad del castaño llamada de la “tinta”. Ministerio de Agricultura, Instituto Nacional de Investigaciones Agronómicas. Estación de Fitopatología Agrícola de la Coruña. Trabajos (serie Fitopatogia), 188. Madrid.

Vettraino, A. M., Natili, G., Anselmi, N. and Vannini, A. 2001. Recovery and pathogenicity of Phytophthora species associated with a resurgence of Ink Disease in Castanea Sativa in Italy. Plant Pathology, 50 (1): 90-96.

Wallace, H. R. 1978. The Diagnosis of plant diseases of complex etiology. Annual. Review Phytopathology, 16:376-402.

Winton, L. M. & Hansen, E. M. 2001. Molecular diagnosis of Phytophthora lateralis in trees, water, and foliage baits using multiplex polymerase chain reaction. Forest Pathology, 31: 275-283.

Zar, J.H., 1999. Biostatistical Analysis, 4th ed. Prentice-Hall International Inc. Englewood Cliffs, New Jersey.

Zentmeyer, G. A. (1980). Phytophthora cinnamomi and the Diseases it Causes. Monograph 10. American Phytopathological Society. St Paul (USA).

 

¹ Instituto Politécnico de Bragança. Escola Superior Agrária de Bragança, Campus de Santa Apolónia -Apartado 1172, 5301-854 BRAGANÇA egouveia@ipb.pt