An efficient assay for detection of Phytophthora cinnamomi in the rhizosphere of Sweet Chestnut (Castanea sativa Mill.)

E. Gouveia¹, V. Coelho, N. Sousa, S. Coutinho, L. Nunes & Maria Loreto Monteiro

RESUMO

O ciclo biológico de Phytophthora cinnamomi Rands e P. cambivora (Petri) Buisman espécies associadas com a Doença da Tinta do Castanheiro, ocorre integralmente no ambiente solo. A presença de qualquer uma destas espécies parasitas inviabiliza as novas plantações de castanheiro e coloca sérios problemas à manutenção dos soutos já instalados. Para garantir a ausência de propágulos dos parasitas no material de multiplicação do castanheiro e avaliar o estado sanitário dos solos é necessário que os métodos de detecção sejam sensíveis e rápidos, o que nem sempre é conseguido com as espécies de Phytophthora cujo ciclo de vida ocorre no ambiente solo. Neste estudo desenvolveuse e optimizou-se um método de biodetecção conjugado com a utilização de meios de cultura selectivos. Como material biológico utilizaram-se discos de folha de castanheiro (Castanea sativa), azevinho (Ilex aquifolium) e camélia (Camellia japonica), em condições de temperatura constante (25º) e em condições normais de laboratório com a adição ou não de biocidas (pimaricina e penicilina) na água de diluição do solo. Os discos de folha de castanheiro foram mais eficientes na detecção de Phytophthora, obtendo-se maior percentagem de isolamentos positivos no meio de cultura selectivo (P10VPH). Os resultados obtidos neste estudo permitiram estabelecer um protocolo experimental de fácil utilização e tornar mais eficiente a detecção de Phytophthora cinnamomi associada com a Doença da Tinta do Castanheiro.

ABSTRACT

The life cycle of Phytophthora cinnamomi Rands and P. cambivora (Petri)Buisman, both species associated with Ink Disease of Chestnut, occurs entirely in soil. The presence of any of these parasitic species is a limiting constraint for new plantations of sweet chestnut and represents a serious problem for established groves. Sensitive and fast detection methods are necessary to guarantee the absence of inoculum in the propagation material and to evaluate the sanitary condition of soils. In this study a method that involved a baiting assay conjugated with selective agar medium was developed. As biological baits, leaf discs of sweet chestnut (Castanea sativa), holly trees (Ilex aquifolium) and camellia (Camellia japonica) were used, at 25 ºC and normal laboratory conditions with or without addition of biocides (pimaricin and penicillin) in the water of soil dilution. The leaf discs of sweet chestnut were more efficient for detection of Phytophthora and greater percentage of positive isolations were always obtained in the selective medium P10VPH. Results of this study allow us to establish an efficient protocol for detection of P. cinnamomi associated with Ink Disease of Chestnut in the rhizosphere of sweet chestnut.

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¹ Instituto Politécnico de Bragança. Escola Superior Agrária de Bragança, Campus de Santa Apolónia -Apartado 1172, 5301-854 BRAGANÇA egouveia@ipb.pt